儲存條件：4℃ 避光保存，有效期見外包裝。

產(chǎn)品參數(shù)：Ex/Em: 480/520 nm（結(jié)合 dsDNA）

產(chǎn)品介紹 

     PicoGreen 是熒光檢測dsDNA 并進(jìn)行定量的一種產(chǎn) 品，這種方法非常靈敏。常用于分子生物學(xué)技術(shù)：cDNA 文 庫的構(gòu)建、亞克隆的DNA 片段純化及應(yīng)用，比如進(jìn)行DNA 定量、產(chǎn)物擴(kuò)增和引物的進(jìn)一步檢測。常規(guī)的DNA 含量的 檢測方法是在260nm處測其吸光值。這種方法的主要缺點(diǎn)是 核苷酸、單鏈核酸和蛋白質(zhì)對信號的影響很大，并且還會受 到核酸制備過程中污染物的干擾，無法區(qū)分DNA和RNA， 而且這種方法不靈敏（5 μg/mL dsDNA溶液A260 = 0.1）。 PicoGreen 定量檢測方法簡單、方便，成為生物制品殘留 DNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)。

     PicoGreen 只有與dsDNA 結(jié)合后才發(fā)出熒光，并且所 發(fā)熒光強(qiáng)度與DNA 濃度成正比。 PicoGreen 可以檢測出 25pg/mL - 1000ng/mL 范圍內(nèi)的dsDNA，且線性關(guān)系較好 (R2>0.99)。

使用方法 

試劑制備

     PicoGreen dsDNA 定量試劑是以1 mL 的濃縮液形式 保存在無水的DMSO（二甲基亞砜）中。實(shí)驗(yàn)時(shí)，配制操 作溶液：2× PicoGreen試劑，將濃縮液用1×TE（10 mMTris-HCl，1 mM EDTA，pH7.5）按1:200的比例稀釋。對 于終體積為200 μL 的檢測體系，如果要準(zhǔn)備足夠的操作溶 液測定20 個(gè)樣品，可在2 mL 1× TE中加入10 μL PicoGreen dsDNA 定量試劑；對應(yīng)終體積為2 mL 的檢測體系，檢測 20 個(gè)樣品，則需要在20 mL 1× TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表 面，要在塑料容器中配制。PicoGreen 試劑見光易降解，因此要注意避光保存。

     溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)方法 

1. 標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制： 

     Sigma 小牛胸腺嘧啶DNA 干粉1 mg（Tris，Nacl等濃度已成標(biāo)準(zhǔn)體系），加入1 mL 雙蒸水，配制成1 mg/mL 的 標(biāo)準(zhǔn)液。

2. 染料工作液的配置： 

     5 μL PicoGreen 加入1 mL TE（注意：用1×TE將 PicoGreen 稀釋200 倍，現(xiàn)用現(xiàn)配，注意避光）。

3. 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋： 

     （1）母液稀釋：取10 μL（1 mg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液加入到990μL TE 溶液中，稀釋成10 μg/mL，取10 μL（10 μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液加 入到990 μL TE 溶液中，稀釋成100 ng/mL。 

     （2）倍比稀釋：取800 μL（100 ng/mL）的標(biāo)準(zhǔn)液加入到 200 μL TE 溶液中，濃度為80 ng/mL，取500 μL（80 ng/mL） 的標(biāo)準(zhǔn)液加入到500 μL TE溶液中，稀釋到40 ng/mL；依次 倍比稀釋，配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml. 

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：倍比稀釋后的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液和染料工作液各取100 μL 混勻，避光室溫放置5 min。使用FB-15 型便攜式熒光儀檢測樣品的熒光值：將混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在樣品中引入氣泡，輕彈微量檢測皿的 外部，可以驅(qū)散氣泡。以1×TE 緩沖液為空白對照，測定樣 品和空白對照的熒光值；或者直接用96 孔板進(jìn)行熒光檢測， 激發(fā)波長480 nm，發(fā)射波長520 nm，用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度 （ng/ml）對應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5. 測量待測樣品的熒光值。根據(jù)制作的DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測樣品濃度。

注意事項(xiàng)

     1. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

     2. PicoGreen 工作液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，以保證最佳結(jié)果。

     3. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。