PartI: 產(chǎn)品知識(shí) 

Q: Amicon Ultra超濾管都有哪些用途？ 

A: Amicon Ultra超濾管可以用于生物樣品（蛋白，核酸，病毒等）的濃縮，脫鹽，或者更 換buffer。

Q：Amicon Ultra超濾管有哪些規(guī)格？ 

A: Amicon Ultra超濾管提供四種樣本體積的規(guī)格：0.5 mL, 2 mL，4 mL & 15 mL，每種 規(guī)格都含有5種標(biāo)稱截留分子量：3K, 10K, 30K, 50K, 100K。如果處理更大體積的樣本， 歡迎咨詢技術(shù)支持。

Q: Amicon Ultra超濾管的膜材質(zhì)是什么？ 

A: Amicon Ultra超濾管的膜材質(zhì)為再生纖維素膜。 

Q: Amicon Ultra超濾管的化學(xué)相容性如何？ 

A: Amicon Ultra超濾管適用于一般的水溶液或生物學(xué)樣品，特殊樣本的化學(xué)相容性請(qǐng)參考 每個(gè)相應(yīng)User Guide中的“Chemical Compatibility”表格，也歡迎撥打我們的技術(shù)服務(wù)熱 線咨詢。 

Q: 我可以重復(fù)使用超濾管么？ 

A: 所有的離心超濾管都是一次性的，不推薦重復(fù)使用。 

Q: 超濾管可耐受的pH值范圍是多少？ 

A: 對(duì)于再生纖維素膜，說明書中所推薦的pH范圍為3-13。具體酸堿類型及濃度請(qǐng)參考說明 書中的化學(xué)兼容性表。 

PartⅡ: 產(chǎn)品選擇 

Q: 我該如何選擇合適的Amicon Ultra裝置用于蛋白的濃縮？ 

A: 一般我們推薦選擇的超濾管的標(biāo)稱分子量為目標(biāo)蛋白的1/2或者1/3。 

Q: 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少？ 

A: 按照經(jīng)驗(yàn)，我們推薦兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）。

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于核苷酸純化與濃縮么？ 

A: 目前我們只在Amicon Ultra 30kDa MWCO上測(cè)試過137bp到1159bp雙鏈DNA的濃縮 效果（回收率>90%），具體操作方法及回收效率請(qǐng)參考說明書中DNAConcentration部分。

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于病毒濃縮么？ 

A: 可以。對(duì)于慢病毒，我們推薦Amincon Ultra 100kDa MWCO; 對(duì)于腺病毒，推薦 Amincon Ultra 50kDa MWCO. 具體的操作protocol，可以參考我們的病毒濃縮純化試劑 盒：FTLV00003和FTAV00003。 

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于納米顆粒純化與濃縮么？ 

A: 可以。雖然我們沒有內(nèi)部數(shù)據(jù)支持這一應(yīng)用，但是有很多客戶Amicon Ultra超濾管用于納米顆粒的濃縮及純化，并獲得很好的結(jié)果。Amicon Ultra超濾管的標(biāo)稱分子量對(duì)應(yīng)的膜孔 徑范圍請(qǐng)參考下圖：

Q: Amicon Ultra超濾管可以用于外泌小體的純化與濃縮嗎？ 

A: 可以。外泌小體的直徑在30-100nm左右，具體操作可參考下述鏈接： http://www.emdmillipore.com/Web-US-Site/en_CA/- /USD/ViewParametricSearchSimpleOfferSearch?SynchronizerToken=2b698302b8d2f4e477a773d444bf3ca76 d947101e6b05bc1f9b5acfa14a4b929&SynchronizerToken=2b698302b8d2f4e47 7a773d444bf3ca76d947101e6b05bc1f9b5acfa14a4b929&search=&TrackingSear chType=SB+- +Search+Box&SearchContextPageletUUID=&SearchTerm=A+centrifugal+ultrafil tration-based+method+for+enrichment+of+microvesicles+&search= 

Part Ⅲ:實(shí)驗(yàn)操作 

Q: 如果使用Amicon Ultra超濾管，要配什么樣的離心轉(zhuǎn)子，最大離心力是多少？ 

A: 具體參數(shù)請(qǐng)參考下表：

Q: 處理后樣品怎樣收集？ 

A: 兩種方式：移液槍轉(zhuǎn)移和反轉(zhuǎn)離心 （1） 對(duì)于15 mL和4 mL的超濾管，可以直接通過移液槍收集處理后樣品 （2） 對(duì)于0.5 mL和2 mL的超濾管，可以通過反轉(zhuǎn)離心的方式收集處理后樣品：將有濃 縮樣品的超濾管（內(nèi)管）倒置于新的離心管中后，低速離心（1,000 g）后將樣品重新離 心到新離心管中（如圖1中的Recover步驟所示）

Q: Amicon Ultra超濾管的膜會(huì)因?yàn)殡x心時(shí)間過長(zhǎng)而變干么？ 

A: 不會(huì)，因?yàn)?/span>Amicon Ultra有死體積設(shè)計(jì)，總會(huì)有溶液殘留在濾管中。 

Q: Amicon Ultrar超濾管可以用酒精消毒滅菌么？ 

A: Amicon Ultra裝置與70%乙醇是兼容的，但是我們對(duì)滅菌處理的具體方法沒有做相關(guān)的 測(cè)試，所以無法提供更進(jìn)一步的參考信息。 

Q: Amicon Ultra超濾裝置是否可以用于高壓滅菌？ 

A: 不可以，Amicon Ultra都是采用熱封設(shè)計(jì)，不可以用高壓高溫滅菌。 

Q: Millipore是否提供無熱源的超濾裝置？ 

A: 我們提供的超濾裝置均非無熱源的，即使是無菌裝置也可能包含熱源。 

Q: Amicon Ultra超濾管是否不含RNA酶？ 

A: 我們不保證超濾管不包含RNA酶，建議您可以用0.1% DEPC在37度浸泡2小時(shí)，以完全 滅活RNA酶。殘留的DEPC可以用Milli-Q超純水洗滌除去。 

Q: 說明書中推薦在室溫下進(jìn)行離心，考慮到蛋白的穩(wěn)定性，我是否可以在4℃進(jìn)行離心？ 

A: 可以，但是低溫會(huì)增加蛋白樣品的粘性，導(dǎo)致流速減慢，建議可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到原來的 1.5倍。 

Q: 如何對(duì)超濾管進(jìn)行去除內(nèi)毒素的處理？ 

A: 我們提供的超濾管是沒有經(jīng)過去內(nèi)毒素處理的，同時(shí)由于內(nèi)毒素通常以多聚體的形式存在， 大小在10-1000KD之間不等，在超濾的過程中是無法去除的?？蛻艨稍趯?shí)驗(yàn)前通過先用 0.5M NaOH預(yù)清洗，隨后用Milli-Q水/緩沖液buffer清洗的步驟去除大部分內(nèi)毒素。 

Part Ⅳ:結(jié)果分析 

Q: 用Amicon Ultra超濾管去除去污劑是有什么需要注意的嗎？ 

A: 去污劑因其獨(dú)特的性質(zhì)，當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度（Critical Micelle Concentration,  CMC）時(shí)，去污劑分子會(huì)聚集形成微團(tuán)分子而改變分子構(gòu)象，這有可能會(huì)影響去污劑的去除 效果，具體的protocol可以參考 http://www.emdmillipore.com/Web-US-Site/en_CA/- /USD/ViewParametricSearchSimpleOfferSearch?SearchTerm=Detergent+removal+using+Amicon%C2%AE+ Ultra+or+Microcon%C2%AE+centrifugal+ultrafilters+&SelectedSearchResult=S FDocumentSearch&SearchContextPageletUUID= 

Q: 我的蛋白在濃縮時(shí)出現(xiàn)了沉淀為什么？ 

A: 蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。我們建議蛋白濃縮后的最終濃度 不超過20mg/ml. 對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，我們建議的改進(jìn)方法是： 1）離心力降為推薦離心力的30%-50%。 2）改選擇下一級(jí)過濾裝置（如原本選用10K，此時(shí)可以選擇30K） 3）在濃縮過程中，取出超濾管，用槍頭反復(fù)吹吸幾次。 

Q: 濃縮后我發(fā)現(xiàn)濃縮液中沒有目的蛋白，可能的原因是？ 

A: 首先，Amicon Ultra超濾管的最低起始蛋白濃度為25ug/ml. 請(qǐng)確保您的樣本的起始濃度 大于這個(gè)濃度。 其次，如果問題仍然出現(xiàn)。請(qǐng)不要丟棄您的樣本濾過液，以做下一步分析： 1）如果您的樣本在濾過液中，那么請(qǐng)排查： a) 您是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b) 使用的離心力是否是在最高范圍內(nèi)？如果您使用的是rpm，請(qǐng)換算成相應(yīng)的g離心，

具體換算方法請(qǐng)參考：https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm c) 離心機(jī)最近是否有校準(zhǔn)過？ d) 您是否首次嘗試這個(gè)蛋白？如果能確保你用同樣的超濾管對(duì)其他蛋白成功操作的話， 那么有可能是您的目的蛋白的原因。有時(shí)蛋白會(huì)因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影 響濃縮效果，建議選用上一分子量級(jí)別的超濾管（如原本選用30K，此時(shí)可以選擇 10K）。 2）如果您的樣本也不在濾過液中： a) 您的樣本起始蛋白濃度是否大于25ug/ml？ b) 您用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c) 您的目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具體解決方法請(qǐng)參考上面的關(guān)于蛋白沉淀的 FAQ。 

Q: 我用濃縮后的蛋白做下游分析時(shí)發(fā)現(xiàn)有干擾，可能原因？ 

A: Amicon? Ultra-4裝置的超過濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可用緩沖液 或Milli-Q?水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Milli-Q? 水再次清洗后甩干。 

Q: 有時(shí)候我用超濾離心管連水都離不下來，可能原因？ 

A: Amicon? Ultra-4裝置的超過濾薄膜含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況，先用0.1 N  NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用， 如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀態(tài)，避免重新干燥。 

Q: 使用超濾管對(duì)蛋白進(jìn)行濃縮的過程中懷疑目的蛋白和膜之間可能存在非特異性吸附，如何 改善這一現(xiàn)象？ 

A: 超濾管使用的是再生纖維素膜的材質(zhì)，擁有極低的蛋白吸附能力。但是對(duì)于一些疏水性蛋 白或非極性蛋白，它們和膜的非特異吸附可能會(huì)增強(qiáng)，對(duì)于這種情況，客戶可以嘗試在實(shí)驗(yàn) 前對(duì)超濾管進(jìn)行封閉處理，詳細(xì)步驟可聯(lián)系技術(shù)支持。 

同時(shí)也可建議客戶換成Amicon Ultra 0.5或2來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過減小膜面積來降低非特異性 吸附。

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