A、關(guān)于基質(zhì)膠應(yīng)用的常見問題

1.ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)用于哪些實驗？
ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)可進行體內(nèi)應(yīng)用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高濃度蛋白同時可使得
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)被注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便
于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何將ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)用于3D培養(yǎng)？怎樣制作3D膠？需要將細胞嵌入到
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可進行體外應(yīng)用研究，如制備厚層包被用于3D細胞培養(yǎng)。細胞可以內(nèi)嵌在
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中生長或者直接接種在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面（覆蓋法）生長。

3.什么情況下，需要使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)？
對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，如使用熒光染料或Drabkins法計數(shù)內(nèi)皮
細胞成管實驗。對于子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng)，也需使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)。
此外，酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似，有類雌激素效應(yīng)。在實驗動物體內(nèi)具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。

4.如何從ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中收獲細胞？
推薦使用中性蛋白酶消化或細胞回收方案來收獲培養(yǎng)在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中的細胞。
（1）中性蛋白酶消化
中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白
。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進行檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
（2）細胞回收
對于代謝研究和需抽提細胞中RNA時，建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶消化的細胞收獲。因為
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應(yīng)設(shè)置一個ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)（不接
種細胞）的對照組。
（3）其它
降低溫度至4℃-6℃使ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)解聚，以適當(dāng)轉(zhuǎn)速離心破壞ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)結(jié)構(gòu)
，獲得單細胞懸液。此方法僅適合少部分應(yīng)用場景。

5.哪些情況應(yīng)該選用薄膠，哪些情況應(yīng)該選用厚膠，3D細胞培養(yǎng)有哪些應(yīng)用？
薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖；如原代細胞培養(yǎng)，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠。
厚膠主要用于3D細胞培養(yǎng)；如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結(jié)構(gòu)（RingAssay），以及進行細胞侵襲實驗等。
3D細胞培養(yǎng)實驗，可以建立起生理上的細胞-細胞與細胞-細胞外基質(zhì)相互作用，主要是用于研究細胞與細胞間的相
互作用以及更復(fù)雜的結(jié)構(gòu)作用，如生物組織等。

6.進行內(nèi)皮管形成實驗，應(yīng)該選用多大濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)呢？
進行該實驗，ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低濃度應(yīng)不低于10mg/mL。

7.做細胞侵襲實驗，需要使用多少ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行包被？
進行細胞侵襲實驗，以包被24孔板為例，推薦使用每孔0.1mL(濃度200-300μg/mL)的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)
（貨號為082704）。

8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的最低成膠濃度是多少？
不同的實驗需要不同濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，用戶應(yīng)該根據(jù)具體的實驗需求確定。
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低成膠濃度為3mg/mL。稀釋時不能簡單進行體積倍比稀釋，不同批次間的
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)濃度有差異，應(yīng)該根據(jù)最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血
清培養(yǎng)基）的量。用于體內(nèi)研究的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應(yīng)低于
4mg/mL。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊在體內(nèi)可以維持多長時間？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊可以在體內(nèi)維持至少一周的時間。

10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以誘導(dǎo)ES/iPS細胞分化嗎？
可以的，已經(jīng)有相關(guān)論文報道ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以用于ES/iPS細胞的分化研究。

B、關(guān)于基質(zhì)膠操作的常見問題

1.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)時，需要將移液管、吸頭和離心管預(yù)冷嗎？
是的。因為ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在高于10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作基底膜基質(zhì)時使用預(yù)冷
的移液管、吸頭和離心管。

2.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會快速聚合嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在22℃至35℃時會快速聚合成膠。

3.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)包被過的培養(yǎng)皿可以儲存多長時間呢？
包被過的培養(yǎng)皿最好當(dāng)天使用，具體情況取決于實驗?zāi)康?。需要保存的情況下，可在37°C培養(yǎng)箱中最多存放7天。保
存時ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面需要使用無血清培養(yǎng)基均勻覆蓋，保持濕潤。

4.怎樣稀釋ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)?
使用冰上預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基或者pH7.4的PBS對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行適當(dāng)比例的稀釋。

5.應(yīng)該如何對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行移液操作?
推薦使用預(yù)冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預(yù)冷。吸液時不要觸及瓶子底部；分液時切忌過快、
用力過猛。如果使用移液管分液5mL時，應(yīng)該吸取6mL，分液到移液管內(nèi)仍有1mL時即停止；如果使用自動移液器，按壓
到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進行分液。

6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以反復(fù)凍融嗎？
建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝，保存。

7.未稀釋的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中出現(xiàn)的沉淀應(yīng)該怎么樣處理？
4℃下低速離心，去除沉淀物。

8.未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)應(yīng)該怎樣保存？
與細胞培養(yǎng)基或緩沖液混合過但未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)，不建議保留再用。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以儲存在-70℃嗎？
可以。 ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行分裝，
儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質(zhì)的小管中，方便保存和使用。

10.為什么細胞沒有貼壁，ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)也脫落了？
首先，需要檢查細胞的接種濃度是否過高， ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的用量應(yīng)等同于細胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)基的用
量。其次，如果ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)被稀釋到過低的濃度，形成的膠體容易從組織培養(yǎng)器皿表面分離。

11.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)培養(yǎng)的細胞，如果需要進行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒
光檢驗，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定。為避免固定后出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定
劑，常用于電鏡觀察。如果用戶需要進行免疫熒光檢驗，加入戊二醛后，會出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題，我
們建議用戶在固定之后，使用NaBH4使熒光淬滅。NaBH4極易起泡，進行該步驟時，必須在水平操作臺上小心操作，避
免晃動，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進行固定，如0.1%到0.5%，濃度越低，背
景熒光信號越少。

C、關(guān)于基質(zhì)膠成分的常見問題

1.為什么我的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)很粘稠？
基質(zhì)膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL，基質(zhì)膠會顯得非常厚重。
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可直接使用
，如用于培養(yǎng)腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內(nèi)后，使細胞保持原位，便于原位分析和/或以后的切除等；
或者稀釋后，按照標(biāo)準(zhǔn)濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用方法使用，具體稀釋濃度根據(jù)實驗需求確定。
除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個運輸過程中必須
使用干冰冷藏。如果儲藏ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的冰箱帶有自動除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質(zhì)膠
成膠。所以，切忌將ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)儲藏于此類冰箱中。為保證ABW?Matrigengel底膜基質(zhì)的使用效果
，凍融次數(shù)應(yīng)該盡可能減少。拿到新的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)后，請按照單次用量進行分裝。每次融化操作，
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)都應(yīng)置于冰上。如果ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在成膠狀態(tài)被凍住，再次融化時將不
能成恢復(fù)液體狀態(tài)。

2.為什么ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在37°C成膠，而在4°C時卻呈液體狀態(tài)？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜，新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層
粘連蛋白，IV型膠原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構(gòu)成了
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)。
在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價鍵可以結(jié)合，促使ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)形成凝膠。而在低溫條
件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價鍵結(jié)合，所以ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)呈現(xiàn)液體狀態(tài)。

3.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有DNA和/或RNA嗎？
是的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)沒有經(jīng)過DNA酶或RNA酶消化處理，可能會含有痕量的DNA、RNA。

4.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和金屬蛋白酶（MMPs）嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有微量的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），也可能含有小鼠腫瘤細胞來源的痕量金屬
蛋白酶（MMPs）。

5.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有LDEV嗎?
沒有的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)經(jīng)免疫方法及PCR方法檢測，并不含有乳酸脫氫酶增高病毒（LDEV）或者乳
酸脫氫酶增生病毒（LDHV）。此外，我們還針對小鼠群體及腫瘤來源篩查了其他種類的病毒，詳細信息請參見產(chǎn)品分
析證明書COA。

6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有尿素嗎？
沒有的。在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)生產(chǎn)過程中使用了尿素，后續(xù)流程中經(jīng)過透析方法已經(jīng)去除了。

7.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用的什么緩沖液？
低葡聚糖DMEM(1g/L)，其中包含50μg/mL慶大霉素。

8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有纖維連接蛋白（Fibronectin）嗎？
是的，通過使用WesternBlot檢驗，我們在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了微量的纖維連接蛋白
(Fibronectin)。

9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有玻連蛋白（Vitronectin）嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是從小鼠腫瘤組織提取的，某些腫瘤組織中可能含有微量的血液，因此
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中可能會有痕量的玻連蛋白（vitronectin）。

10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還有什么別的物質(zhì)？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷，以及腫瘤細胞產(chǎn)生的其他未知蛋白或分子。

11.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的生產(chǎn)過程會引起層粘連蛋白變性嗎？
不會引起層粘連蛋白變性。

12.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是多少？
20℃條件下， ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是1.3406到1.3407，相對折射率為1.0056（同等條件下，水的
折射率為1.333）。

13.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會有自發(fā)熒光嗎？
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種蛋白混合物，經(jīng)過透析處理后溶解在DMEM培養(yǎng)基中。為防止微生物污染，培
養(yǎng)基中添加了慶大霉素。所以ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可能引發(fā)熒光的組分包括其中的蛋白質(zhì)成分，維生素成分以
及慶大霉素（氨基糖苷類抗生素）。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態(tài)，建議使用者建立對照實驗，在所需要的波長條
件下進行對比，以便排除背景熒光。

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